實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用注意事項(xiàng)

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒該染料與雙鏈DNA結(jié)合后，能夠產(chǎn)生強(qiáng)度高于SYBR Greenl的熒光。結(jié)合了以下諸多優(yōu)勢：熱啟動(dòng)酶、優(yōu)化的緩沖液、*熒光染料，可有效地提高mRNA表達(dá)水平檢測的可靠性、重復(fù)性和靈敏度。qPCRmix為即用型的2x預(yù)混母液，該混合母液經(jīng)過處理，穩(wěn)定性高，主要包含：雙鏈DNA結(jié)合染料、熱啟動(dòng)酶、MgCl2、dNTPs、反應(yīng)緩沖液，可確保產(chǎn)生實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果。

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用注意事項(xiàng)：

　　1.保存

　　未拆封的試劑盒，請于-20℃保存；拆封之后，應(yīng)在4℃保存。在試劑消耗量較少的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮將試劑盒的按照組分單獨(dú)分裝，后保存在-20℃。

　　2.配置

　　試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物，在靜置情況下會發(fā)生分層現(xiàn)象，因此，試劑盒現(xiàn)配現(xiàn)用，震蕩混勻，避免反復(fù)凍融，避免預(yù)混。其中，反復(fù)凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。在擴(kuò)增體系的選擇時(shí)，盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系，再根據(jù)檢材情況加入模板，之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。

　　3.切勿預(yù)混因試劑盒中酶的活性較高，將各組份按照比例混合之后，即使沒有達(dá)到它的合適溫度，但也可能發(fā)生與引物結(jié)合，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。

　　4.陰陽性參照

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果會受提取、擴(kuò)增和電泳等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響，因此，每次擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)都應(yīng)該添加一組陰陽性參照。這樣，當(dāng)結(jié)果異常的時(shí)，我們就可以結(jié)合陰陽性參照的表現(xiàn)，排查問題出在哪個(gè)環(huán)節(jié)。

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒特點(diǎn)：

　　1.高靈敏度：可定量檢測低拷貝靶基因。

　　2.穩(wěn)定性增強(qiáng)。

　　3.靈敏度更高，Ct值更小，對PCR反應(yīng)具有更小的抑制作用。

　　4.熱啟動(dòng)酶性能強(qiáng)勁、可靠。