定量PCR檢測(cè)試劑盒使用時(shí)應(yīng)注意以下方面

　　定量PCR檢測(cè)試劑盒的適用范圍廣，包含一系列生物樣品，如血液、動(dòng)物、植物、真菌、酵母、細(xì)菌和病毒等，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，減少大量的核酸純化試劑的消耗，問(wèn)研究人員節(jié)約大量的時(shí)間和科研費(fèi)用。對(duì)于商檢、CDS、疾病診斷的用戶，還可以在很大程度上降低污染，包含操作人員的安全。

　　定量PCR檢測(cè)試劑盒使用時(shí)應(yīng)注意以下方面：

　　1.保存

　　未拆封的試劑盒，請(qǐng)于-20℃保存；拆封之后，應(yīng)在4℃保存。在試劑消耗量較少的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮將試劑盒的按照組分單獨(dú)分裝，后保存在-20℃。

　　2.配置

　　PCR試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物，在靜置情況下會(huì)發(fā)生分層現(xiàn)象，因此試劑盒現(xiàn)配現(xiàn)用，震蕩混勻，避免反復(fù)凍融，避免預(yù)混。其中，反復(fù)凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。

　　在擴(kuò)增體系的選擇時(shí)，盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系，再根據(jù)檢材情況加入模板，之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。

　　3.切勿預(yù)混

　　因試劑盒中酶的活性較高，將各組份按照比例混合之后，即使沒(méi)有達(dá)到它的適溫度，但也可能發(fā)生與引物結(jié)合，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。

　　4.陰陽(yáng)性參照

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)受提取、擴(kuò)增和電泳等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響，因此，每次擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)都應(yīng)該添加一組陰陽(yáng)性參照。這樣，當(dāng)結(jié)果異常的時(shí)，我們就可以結(jié)合陰陽(yáng)性參照的表現(xiàn)，排查問(wèn)題出在哪個(gè)環(huán)節(jié)。

　　5.陽(yáng)性參照是否通用

　　雖然多數(shù)試劑盒的陽(yáng)性參照都是007，但是案件試劑盒和建庫(kù)試劑盒的陽(yáng)性參照濃度不同，通常來(lái)說(shuō)案件試劑盒的濃度更低，擴(kuò)增時(shí)需選用試劑盒相對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性參照。