球孢子菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，產(chǎn)品僅用于科研在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

球孢子菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產(chǎn)品僅用于科研
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。產(chǎn)品僅用于科研
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。產(chǎn)品僅用于科研
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：

間苯異氰酸酯石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位間接染色試盒

N-基-3-氧基芐胺石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位直接染色試盒

4--3-三氟基苯腈細(xì)胞衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試盒（與紅細(xì)胞無法分別）

4--2-苯醛全組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試盒

5--1-戊烯冰凍切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試盒

2-基-5-羥基嘧啶石蠟切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位間接染色試盒

2,5-二氧基苯磺酰石蠟切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位直接染色試盒

1,5-二-2,4-*細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位染色試盒

雙噻嗪全組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位染色試盒

四化鄰苯二酸酐冰凍切片組織衰老晚期特異性脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位染色試盒

球孢子菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒6-氟煙酸酯石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位間接染色試盒

2--4-氧基苯酸石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位直接染色試盒

3-羧基-4-氟苯硼酸細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素油性紅原位染色試盒（與紅細(xì)胞無法分別）

4--3-磺酰胺基苯酸全組織衰老特異性早期脂褐素油性紅原位染色試盒

1,2-苯二酸冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素油性紅原位染色試盒ABHD1  肺α/β水解酶蛋白1抗體土荊芥

ABH8/ALKBH8  AlkB同源蛋白8抗體款冬花

ABCG8  三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員8抗體綿大戟

ABCG5  三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員5抗體橙皮

ABCG4  ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體制何首烏

ABCG2/CD338  三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體香薷

ABCG1  三酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體雄蠶蛾（家蠶）

ABCF3  三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體大風(fēng)子

ABCF1  ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體梧桐子

ABCE1  核糖核酸酶L抑制蛋白抗體滿山白

ABCD1/CCL22  嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體功勞木

ABCB6  ATP結(jié)合蛋白家族6抗體燈心草

ABCB5  ATP結(jié)合蛋白家族5抗體川楝子

ABCA9  三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9抗體匙羹藤葉

ABCA7  三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體菝葜（金剛藤）